Обратная реакция кумбса. Реакция Кумбса непрямая (антиглобулиновый тест, выявление неполных антиэритроцитарных антител), кровь

Реакция Кумбса - эффективный метод выявления антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител крови человека в непрямой реакции агглютинации. Основа теста - использование при типировании антигенов эритроцитов специфических моноклональных реагентов на основе иммуноглобулинов класса G (IgG) с последующим применением на втором этапе реакции антиглобулиновой сыворотки Кумбса (АГС).

АГС производится путем смешивания сыворотки из крови лабораторных животных, иммунизированных иммуноглобулинами класса G человека, и моноклональных антител к одному из компонентов - C3D комплементу сыворотки человека. АГС вызывает агглютинацию эритроцитов, сенсибилизированных специфическими антителами. При отсутствии антител на эритроцитах под воздействием АГС положительная реакция не происходит.

Непрямая реакция Кумбса позволяет определить наличие:

• антигенов эритроцитов, выявляемых IgG-реагентами («неполными» антителами, например, моноклональными реагентами анти-D, анти-F Y a , анти-F Y b);
• антиэритроцитарных антител класса IgG.

Непрямой антиглобулиновый тест: выявление антигенов эритроцитов

Приводим методику непрямой реакции Кумбса на примере цоликлона анти-D IgG.

1. Промаркируйте чистую пробирку: укажите ФИО исследуемого лица.
2. Внесите в пробирку 2 капли (приблизительно 0,1 мл) цоликлона анти-D IgG.
3. Добавьте 2 капли 5 % взвеси предварительно отмытых физиологическим раствором анализируемых эритроцитов. Смешайте исследуемые образцы с цоликлоном.
4. Инкубируйте смесь на водяной бане или в термостате при 37 °С на протяжении 30 минут.
5. Добавьте в пробирку пастеровской пипеткой 5 - 10 мл физраствора.
6. Центрифугируйте пробирку с центробежным ускорением 1200 g при 18 - 25 °С на протяжении одной минуты.
7. Удалите физраствор.
8. Повторно проведите процедуру отмывки эритроцитов с помощью центрифугирования еще 2 - 3 раза.
9. Добавьте 2 капли антиглобулиновой сыворотки к осадку кровяных телец, выполните перемешивание.
10. Центрифугируйте пробирку с центробежным ускорением 1200 g в течение минуты при температуре 18 - 25 °С.
11. Добавьте с помощью дозатора или пастеровской пипетки 3 - 5 капель физраствора.
12. Ресуспендируйте осадок и визуально оцените наличие агглютинации. Выраженные агглютинаты на дне пробирки на фоне прозрачного раствора свидетельствуют об обнаружении антигена эритроцитов. Непрозрачная суспензия кровяных телец говорит об отсутствии антигена.

Реакция Кумбса: скрининг изоиммунных антиэритроцитарных антител

Исследование осуществляется в рамках проведения пробы на индивидуальную совместимость по всем антигенам эритроцитов крови донора и реципиента. Заключение о полной совместимости сыворотки реципиента с эритроцитами донора производят на основании отсутствия гемолиза и/или агглютинации на всех этапах проведения анализа. Признаки гемолиза и/или агглютинации на каком-либо этапе тестирования говорят о несовместимости образцов крови.

Оценка совместимости по системе АВ0, обнаружение «холодовых» антител

1. Приготовьте образец крови донора:
   • внесите в пробирку автоматическим дозатором 0,2 мл крови;
   • 3 раза отмойте эритроциты в 5,0 мл физиологического раствора;
   • ресуспендируйте осадок в 3 - 4 мл раствора с низкой ионной силой LISS.
2. Промаркируйте вторую чистую пробирку: укажите ФИО реципиента и ФИО донора.
3. Внесите автоматическим дозатором 0,1 мл сыворотки реципиента в промаркированную пробирку.
4. Добавьте 2 капли 5 % суспензии эритроцитов в растворе LISS.
5. Без промедления центрифугируйте смесь с центробежным ускорением 1200 g при температуре 18 - 25 °С на протяжении 15 - 20 секунд.
6. Легким покачиванием пробирки отделите осадок от дна. Оцените наличие агглютинатов. Присутствие гемолиза и/или агглютинатов означает:
   • несовместимость по системе АВ0;
   • наличие в сыворотке больного «холодовых» антител класса IgM или IgА, не специфичных к антигенам АВ0.

Выявление «тепловых» антител

1. При отсутствии гемолиза и/или агглютинатов инкубируйте пробирку 10 - 15 минут при 37 °С.
2. Центрифугируйте пробирку при 1200 g на протяжении 15 - 20 секунд при комнатной температуре.
3. Встряхните пробирку и проверьте наличие гемолиза и/или агглютинатов в супернатанте. Положительный результат говорит об обнаружении в сыворотке больного «тепловых» IgM-антител против антигенов эритроцитов донора.

Обнаружение IgG-антител в тесте Кумбса

1. При отрицательном результате на прошлом этапе исследования добавьте в пробирку пастеровской пипеткой 5 мл 0,9 % раствора NaCl.
2. Центрифугируйте пробирку при 1200 g на протяжении 15 - 20 секунд при температуре воздуха 18 - 25 °С. Пастеровской пипеткой аккуратно избавьтесь от супернатанта.
3. Повторно выполните отмывание эритроцитов еще 2 - 3 раза.
4. Добавьте в пробирку 1 - 2 капли антиглобулиновой сыворотки. Выполните тщательное перемешивание.
5. Центрифугируйте пробирку при 1200 g 15 - 20 секунд.
6. Аккуратно разбейте осадок эритроцитов и проведите визуальную оценку результата реакции. Выявление агглютинации означает присутствие в сыворотке больного IgG-антител против антигенов эритроцитов донора.

Или растворенных в плазме.

Синонимы: антиглобулиновый тест, Coombs test, AGT, indirect/direct antiglobuline test, IAT, NAT, DAT, indirect/direct Coombs test

Проба Кумбса – это

анализ, с помощью которого выявляют иммунизированность и антитела к эритроцитам.

Виды пробы Кумбса

• прямая проба Кумбса – определяет антитела зафиксированные на поверхности эритроцитов. Проводится при подозрении на аутоиммунную гемолитическую анемию , гемолиз при аутоиммунных заболеваниях, после приема лекарств (метилдопа, пенициллин, хинин), после переливания крови и гемолитической болезни новорожденных .

Эритроциты были сенсибилизированы in vivo – к ним уже прочно прикреплены антитела, а добавление антиглобулиновой сыворотки (анти-IgG) вызывает склеивание сенсибилизированных клеток, что и видно невооруженным глазом.

• непрямая проба Кумбса – выявляет антиэритроцитарные антитела в плазме крови, выполняют перед переливанием крови и при беременности .

Антиэритроцитарные антитела - разновидность аутоантител, т.е. антител против собственных же тканей. Аутоантитело возникает при патологической реактивности иммунной системы на некоторые препараты, например, на высокие дозы пенициллина.

Эритроциты на своей поверхности содержат различные химические структуры (гликолипиды, сахариды, гликопротеины и протеины), в медицине именуемые антигенами . Человек наследует от родителей определенную карту антигенов на каждой красной клетке крови.

Антигены объединены в группы и подле этого кровь делят на несколько групп - по системе AB0, резус, Келл, Левис, Кидд, Даффи . Самые известные и значимые в работе врача - AB0 и резус-фактор (Rh).

Система AB0

Резус-принадлежность человека определяется наличием именно этих антигенов. Особо важный антиген эритроцитов – антиген D. Если он присутствует, то говорят о резус-положительной крови RhD, а если его нет – о резус-отрицательной Rhd.

Если к антигенам эритроцитов присоединится соответствующее антитело, то эритроцит разрушается – гемолизирует .

Показания к проведению прямого антиглобулинового теста

• первичная аутоиммунная гемолитическая анемия
• гемолитическая анемия при аутоиммунных, опухолевых, инфекционных заболеваниях
• лекарственная аутоиммунная гемолитическая анемия
• посттрансфузионная гемолитическая анемия (дни - месяцы)
• гемолитическая болезнь новорожденного (несовместимость по одной из групп крови)

Показания к проведению непрямого антиглобулинового теста

• перед переливанием крови
• при беременности резус-отрицательной женщины

Аутоиммунная гемолитическая анемия

Аутоиммунная гемолитическая анемия (первичная) – классическое аутоиммунное заболевание с неизвестными причинами. Предполагают нарушение в процессе взаимодействия на уровне иммунной системы, что ведет к восприятию собственных эритроцитов как чужих. Клетки продуцируют антитела класса IgG (реагируют при t 37°C) и/или IgM (при t 40°C), присоединяясь к поверхности эритроцита запускают ряд ферментов (систему комплемента) и «продырявливают» стенку эритроцита, что приводит к его разрушению – гемолизу .

Симптомы гемолитической анемии

• усталость, общая слабость, раздражительность
• одышка
• боль в животе, тошнота
• темный цвет мочи
• боли в спине
• желтушное окрашивание кожи и слизистых оболочек
• увеличение печени, селезенки
• снижение количества эритроцитов и гемоглобина в общем анализе крови

Положительный результат прямой пробы Кумбса на 100% подтверждает диагноз аутоиммунной гемолитической анемии, доказывая ее аутоммунное происхождение. Одновременно отрицательный результат - не дает возможностиснять диагноз.

Вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия и положительная проба Кумбса могут быть при следующих заболеваниях:

• системная красная волчанка
• синдром Эванса
• макроглобулинемия Вальденстрема
• пароксизмальная холодовая гемоглобинурия
• хронический лимфолейкоз
• лимфомы
• инфекционный мононуклеоз
• инфицирование микоплазмой пневмонии
• сифилис

Положительность антиглобулинового теста при данных заболеваниях не служит диагностическим критерием, а является одним из симптомов заболевания.

Гемолитическая болезнь новорожденного

Причина гемолитической болезни новорожденных - несовместимостьгрупп крови у матери и плода, в большинстве случаев по системе резус, в одиночных - по системе АВ0, казуистично - по другим антигенам.

Резус-конфликт развивается, если у резус-отрицательной женщины плод унаследовал от отца резус-положительную кровь.

Заболевание у новорожденного развивается только в том случае, если мать уже выработала антитела к соответствующим антигенам, что бывает после предыдущих беременностей, родов , абортов, переливания несовместимой крови. Наиболее частая причина запуска синтеза антител к антигенам эритроцитарной оболочки - роды (фето-материнское кровотечение). Первые роды в основном проходят без осложнений, но вот последующие - чреваты гемолитической болезнью новорожденного в первые дни после рождения.

Симптомы гемолитической болезни новорожденного

• желтушность кожи
• анемия
• бледность кожи и слизистых
• увеличение печени и селезенки
• нарушения дыхания
• отек всего тела
• возбуждение и постепенное угнетение центральной нервной системы

Анемия после переливания крови

Непрямую пробу Кумбса проводят перед переливанием крови для оценки совместимости, а прямую пробу Кумбса - после него при подозрении на посттрансфузный гемолиз, т.е. при наличии симптомов, таких как лихорадка, озноб, поливость (читай ниже). Цель анализа – выявить антитела к перелитым эритроцитам, которые связались с эритроцитами получившего кровь и являются причиной посттрансфузного гемолиза, а также преждевременного удаления донорских эритроцитов из кровообращения у реципиента (того, кто получил кровь).

Симптомы гемолитической реакции после переливания крови

• повышение температуры тела
• сыпь на коже
• боли в спине
• красная окраска мочи
• тошнота
• головокружение

Расшифровка пробы Кумбса

Стоит напомнить, что принципиальные правила расшифровки прямого и непрямого антиглобулинового теста одинаковы. Единственное отличие - расположение антител - в крови или уже на красной клетке крови - на эритроците.

• если прямая проба Кумбса отрицательна – это значит что на эритроцитах не «сидит» антитело и причину симптомов нужно искать дальше и провести непрямую пробу Кумбса
• если положительный результат пробы Кумбса выявлен после переливания крови, инфекций, лекарств – положительность может длится до 3 месяцев (время жизни эритроцитов 120 дней - 3 месяца)
• положительный результат антиглобулинового теста при аутоиммунном заболевании может длится месяцы и даже годы

Нормы пробы Кумбса

• прямая проба Кумбса - отрицательно
• непрямая проба Кумбса - отрицательно

Качественно положительный результат измеряется в количестве плюсов от одного до четырех (+, ++, +++, ++++), а количественно в цифровом виде - 1:16, 1:256 и т.д.

4 факта о пробе Кумбса

• предложена впервые в Кэмбридже в 1945 году
• порог чувствительности - не менее 300 фиксированных молекул антител на одном эритроците
• число антител запускающих гемолиз - индивидуально для каждого человека (от 16-30 до 300)
• динамика других лабораторных показателей гемолитической анемии (гемоглобин, билирубин, ретикулоциты) может нормализоваться, а проба Кумбса останется на том же уровне

Недостатки антиглобулинового теста

• нельзя определить силу связывания антигена с антителом
• неизвестно количество связанных антител
• не определяет вид антитела
• положительность пробы Кумбса не поможет определить ее причину
• 0,5% здоровых людей имеют положительную пробу Кумбса без каких-либо признаков гемолитической анемии
• не подходит для контроля успешности лечения, поскольку не укажет активность гемолиза эритроцитов

В норме антитела к эритроцитам в крови отсутствуют.

Прямая проба Кумбса - антиглобулиновый тест (агглютинация в геле, позволяет выявить полные двухвалентные антитела), с помощью которого определяют антитела класса IgG и С3-компонент комплемента на поверхности эритроцитов. Обычно антитела, выявляемые прямой пробой Кумбса, имеют широкую специфичность, не ассоциированную с хорошо установленным антигеном. Положительная прямая проба Кумбса чётко указывает на наличие у больного гемолитической анемии, хотя не все больные с положительным прямым антиглобулиновым тестом страдают этим заболеванием. Приблизительно у 10% больных антитела или компоненты комплемента на мембране эритроцитов не удаётся определить прямой пробой Кумбса (тест отрицательный), но тем не менее они страдают аутоиммунной гемолитической анемией. Для уточнения специфичности антител в таких случаях используют тесты с их элюцией. Прямая проба Кумбса, положительная только к комплементу, обычно имеет отношение к холодовым антителам типа IgM. В этом случае антитела IgM не присутствуют на эритроцитах при базальной температуре тела. Однако вследствие того, что антитела IgM активно фиксируют комплемент, и комплемент остаётся на эритроцитах, при данной форме аутоиммунной гемолитической анемии (болезнь холодовых аггютининов) проба Кумбса будет положительна только к комплементу.

Прямая проба Кумбса положительна при аутоиммунной гемолитической анемии, вызываемой тепловыми антителами, аутоиммунной лекарственной анемии (при приёме метилдофа до 20% больных имеют положительную реакцию), лекарственно-адсорбционном типе гемолитической анемии, иммунокомплексном типе гемолитической анемии (проба положительна только по отношению С3), при аутоиммунной гемолитической анемии, вызываемой холодовыми антителами - болезни холодовых агглютининов (проба положительна только по отношению С3). При пароксизмальной холодовой гемоглобинурии прямая проба Кумбса отрицательная.

Непрямая проба Кумбса - непрямой антиглобулиновый тест (обнаруживает неполные антитела) позволяет выявить атипичные антитела в крови, в том числе аллоантитела, к чужим антигенам эритроцитов. Свое название (непрямая) она получила вследствие того, что протекает в 2 этапа. Первоначально сыворотка крови больного, содержащая неполные антитела, взаимодействует с добавленным корпускулярным Аг-диагностикумом без видимых проявлений. На втором этапе внесённая антиглобулиновая сыворотка взаимодействует с неполными антителами, адсорбированными на антигенах, с появлением видимого осадка. Переливание гомологичных (аллогенных) эритроцитов или беременность - наиболее частые причины образования этих антиэритроцитарных антител. Сочетание положительной непрямой пробы Кумбса с отрицательной прямой пробой ничего не даёт для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии. Положительная непрямая проба Кумбса вызывает определённые трудности при подборе крови для переливания и проведении перекрёстной пробы на совместимость с консервированной кровью, но не имеет другого диагностического значения.

Реакция Кумбса

Реакция Кумбса - антиглобулиновый тест для определения неполных антиэритроцитарных антител. Тест Кумбса используется для выявления антител к резус-фактору у беременных женщин и определения гемолитической анемии у новорождённых детей с резус-несовместимостью, влекущей разрушение эритроцитов . Данный метод был предложен английским врачом Робертом Кумбсом в 1945 году, в связи с чем впоследствии получил название «реакция Кумбса».

Прямая реакция Кумбса

Антитела , находящиеся на поверхности эритроцитов, могут быть как в статичном, так и в свободном состоянии в плазме крови . В зависимости от состояния антител проводится прямая или непрямая реакция Кумбса. Если есть основания для предположения, что антитела зафиксированы на поверхности эритроцитов, проводится прямой тест Кумбса. В этом случае тест проходит в один этап - добавляется антиглобулиновая сыворотка. Если на поверхности эритроцитов присутствуют неполные антитела, происходит агглютинация эритроцитов.

Непрямая реакция

Непрямая реакция Кумбса протекает в 2 этапа. Сначала необходимо искусственно осуществить сенсибилизацию эритроцитов. Для этого эритроциты и исследуемую сыворотку крови инкубируют, что вызывает фиксацию антител на поверхности эритроцитов. После чего проводится второй этап теста Кумбса - добавление антиглобулиновой сыворотки.

Примечания

Wikimedia Foundation . 2010 .

Смотреть что такое "Реакция Кумбса" в других словарях:

РЕАКЦИЯ КУМБСА - (Coombs test) метод определения резусантител на поверхности эритроцитов, которые вызывают осаждение глобулинов в сыворотке крови. Данный тест используется для диагностики гемолитической анемии у младенцев с резус несовместимостью, у которых… … Толковый словарь по медицине

Метод определения резусантител на поверхности эритроцитов, которые вызывают осаждение глобулинов в сыворотке крови. Данный тест используется для диагностики гемолитической анемии у младенцев с резус несовместимостью, у которых наблюдается… … Медицинские термины

- (антиглобулиновал проба) метод обнаружения естественно или искусственно связанных с клетками (обычно с эритроцитами) неполных Ат с помощью антиглобулиновой с ки (А. с.). А. с., преципитируя неполные Ат, включает в этот процесс клетки носители,… … Словарь микробиологии

КУМБСА РЕАКЦИЯ - (по имени британского иммунолога R. R. A. Coombs, род. в 1921, синоним – антиглобулиновая проба) – серологическая реакция, основанная на агглютинации эритроцитов неполными ауто– и изоантителами в присутствии антиглобулиновой сыворотки. При… … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике

РЕАКЦИЯ ТРАНСФУЗИОННАЯ ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ - мед. Трансфузионная гемолитическая реакция (ТГР) гемолиз эритроцитов реципиента или донора (редко), возникающий при переливании крови и её компонентов. Реакции могут быть иммунной или неиммунной природы. Этиология и патогенез Иммунные реакции… … Справочник по болезням

- (R. R. A. Coombs, род. в 1921 г., англ. иммунолог) серологическая реакция, основанная на агглютинации эритроцитов неполными ауто и изоантителами в присутствии антиглобулиновой сыворотки; применяется в трансфузиологии, судебной медицине, а также… … Большой медицинский словарь

КУМБСА РЕАКЦИЯ - Кумбса реакция, серологическая реакция, позволяющая обнаружить неполные антитела, фиксированные на поверхности эритроцитов или содержащиеся в плазме крови. К. р. основана на применении антиглобулиновой сыворотки, получаемой путём гипериммунизации … Ветеринарный энциклопедический словарь

КУМБСА РЕАКЦИЯ - Используется для обнаружения моновалентных или так называемых неполных антител, в частности для анализа групп крови свиней и некоторых других животных … Термины и определения, используемые в селекции, генетике и воспроизводстве сельскохозяйственных животных

См. Кумбса реакция. (

Проба Кумбса – это клинический анализ крови, который проводится, чтобы выявить, содержит ли кровь определенные антитела, которые могут быть небезопасны. Эти антитела приклеиваются к эритроцитам и могут вторгнуться в иммунную систему, а также нанести вред другими способами. В медицинской терминологии это исследование также называют антиглобулиновым тестом (АГТ).

Типы проб Кумбса

Существует два типа проб Кумбса – прямой и непрямой.

Прямая проба Кумбса , также известная как прямой (ПАТ), выявляет ауто-антитела, которые прикрепляются к поверхности эритроцитов. Эти антитела иногда производятся в организме вследствие определенных заболеваний или при приеме определенных медикаментов, таких как прокаинамид, метилдопа или хинидин.

Данные антитела опасны, потому что иногда они вызывают анемию, разрушая эритроциты.

Данный тест иногда назначается для диагностики причины желтухи или анемии.

В норме реакция Кумбса отрицательная.

Положительно при:

• гемолитической болезни новорожденных;
• аутоиммунном гемолизе;
• гемолитических трансфузионных реакциях;
• лекарственной иммунной гемолитической анемии.

Непрямая проба Кумбса , также известная как , используется для обнаружения антител к эритроцитам, содержащимся в сыворотке крови (сыворотка – это прозрачная желтая жидкость крови, которая остается после того, как выводятся красные кровяные тельца и коагулянт).

Непрямая проба Кумбса применяется при переливании крови для определения того, совпадает ли кровь донора с кровью реципиента. Это называется пробой на совместимость, она помогает предотвратить любую неблагоприятную реакцию на кровь донора. Данный анализ также рекомендован беременным женщинам. Некоторые женщины имеют антитела класса IgG, которые могут проникать через плаценту в кровь плода и нанести вред новорожденному, вызвав гемолитическое заболевание, известное как гемолитическая анемия.

Процедура

Кровь берется посредством шприца из вены, обычно с тыльной стороны ладони или на сгибе локтя. Место прокола пред этим тщательно дезинфицируется, а после взятия анализа крови накладывается чистая марля или вата.

Полученная кровь очищается в лаборатории, при этом отделяются красные кровяные тельца. Образец затем последовательно исследуется с применением различных реагентов сыворотки и Кумбса, который противопоставляется . Если не случается агглютинации (слипания красных кровяных телец), это означает положительный результат.

Однако если тест отрицательный, это означает, что в крови имеются антитела, которые действуют против эритроцитов. Это может указывать на различные заболевания, такие как анемия (как естественная, так и спровоцированная приемом медикаментов), сифилис, или микоплазменная инфекция. После получения результатов лечащий врач назначит соответствующее лечение.

Видео